當(dāng)前配備顯微攝影裝置的顯微鏡，其照明設(shè)施與整個(gè)光路幾乎都是按照柯勒照明法的要求設(shè)計(jì)生產(chǎn)的，操作程序比較簡(jiǎn)單也易于掌握，調(diào)整程序如下：
    1）首先將待檢切片置于載物臺(tái)，用4×或10×物鏡調(diào)準(zhǔn)焦點(diǎn)，目的是確定載物臺(tái)的位置（此步很重要，必須先行，否則影響柯勒照明的正確調(diào)整；
    2）再將臺(tái)下聚光鏡的孔徑光闌與視場(chǎng)光闌收縮到zui小位置。如果聚光鏡設(shè)有附加錐光透鏡，應(yīng)將此透鏡移入光路；
    3）用臺(tái)下聚光鏡的升降旋鈕，上下移動(dòng)聚光鏡，使視場(chǎng)光闌的影像清晰地呈現(xiàn)在標(biāo)本平面上；
    4）旋轉(zhuǎn)臺(tái)下聚光鏡上的兩個(gè)定心旋鈕，將視場(chǎng)光闌的影像調(diào)整到視野中心位置處—光學(xué)合軸；
    5）需要特別注意的是：在光學(xué)合軸之前，必須先進(jìn)行顯微鏡機(jī)械軸的合軸調(diào)整，認(rèn)真檢查物鏡、聚光鏡安裝定位是否正確；
    6）調(diào)整視場(chǎng)光闌和孔徑光闌到適當(dāng)位置。
    用柯勒照明觀察標(biāo)本時(shí)，在視野內(nèi)見(jiàn)不到燈絲的影像，所以整個(gè)視野內(nèi)亮度非常均勻，溫度也低不會(huì)損壞標(biāo)本。而均勻的照明是顯微攝影時(shí)重要條件之一。缺點(diǎn)是視野內(nèi)亮度較臨界照明弱一些。
    柯勒照明也有一些常見(jiàn)的問(wèn)題，以下為解決方案：
    1）我們?cè)?jiàn)到一些使用顯微鏡的部門(mén)，從未按柯勒照明法的要求照明系統(tǒng)，甚至在沒(méi)有光學(xué)合軸的情況下，就進(jìn)行顯微攝影。結(jié)果因?yàn)橐曇皟?nèi)的亮度明顯不均勻，所拍攝的相片整個(gè)畫(huà)面的密度也深淺不一。應(yīng)按上述步驟認(rèn)真調(diào)整，這是顯微攝影必須掌握的基本操作技術(shù)。
    2）柯勒照明調(diào)整好后，聚光鏡的位置就應(yīng)固定不動(dòng)，不能隨意升降。有人采用將聚光鏡降低的方法，認(rèn)為這樣可增加影像的景深和反差。這種操作方法是有害的，因?yàn)樗紫绕茐牧丝吕照彰?，?huì)使視野內(nèi)照明不均勻。再者，他降低了數(shù)值孔徑的利用，必將降低物鏡的分辨能力。以此為代價(jià)來(lái)?yè)Q取影像的所謂景深和反差，是極不可取的。
    3）影像清晰差時(shí)，應(yīng)查找各方面因素，絕不能降低聚光鏡的方法解決：如：視場(chǎng)光闌與孔徑光闌是否過(guò)大，應(yīng)按所用物鏡的要求進(jìn)行調(diào)整；物鏡與載玻片、蓋玻片表面是否有污物，必須清潔干凈；切片不符合要求，過(guò)厚、染色過(guò)淡應(yīng)重新制作符合顯微攝影標(biāo)準(zhǔn)的切片；物鏡的光行差校正程度差，顯微攝影應(yīng)選用平像場(chǎng)復(fù)消色差物鏡等。
    4）聚光鏡升降鈕比較靠近調(diào)焦旋鈕，在調(diào)焦時(shí)經(jīng)常誤將聚光鏡升降鈕旋轉(zhuǎn)，從而破壞了柯勒照明。因此特別強(qiáng)調(diào)，每次拍攝前都必須檢驗(yàn)柯勒照明是否正確。檢驗(yàn)方法很簡(jiǎn)單，只需重復(fù)（2）（3）兩步操作即可。聚光鏡如已移位，應(yīng)再次調(diào)整。
    5）為選擇拍攝部位和適當(dāng)?shù)姆糯蟊堵?，需要?jīng)常轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器，換用不同倍率的物鏡。但經(jīng)常發(fā)生物鏡轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)換不到位的情況，機(jī)械軸被破壞，致使光學(xué)軸無(wú)法調(diào)整。這也是不正確使用顯微鏡的常見(jiàn)現(xiàn)象，必然影響成像質(zhì)量。只要堅(jiān)持每次拍攝前檢驗(yàn)柯勒照明，就能立即發(fā)現(xiàn)物鏡不到位的差錯(cuò)，要記住機(jī)械合軸是光學(xué)合軸的基礎(chǔ)。